近年來(lái),核酸檢測(cè)技術(shù)在我國(guó)得到逐步的推廣和應(yīng)用,并已成為血液篩選查實(shí)實(shí)驗(yàn)室的重要實(shí)驗(yàn)手段,但因其靈敏度高的特點(diǎn),同時(shí)實(shí)驗(yàn)室也容易導(dǎo)致污染,特別是核酸的氣溶膠污染比較嚴(yán)重。如何預(yù)防和處理PCR核酸實(shí)驗(yàn)室污染?
核酸污染是困擾絕大多實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)難題。微量的核酸污染會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果,這樣會(huì)對(duì)病人造成誤診,耽誤病情。如任由此情況發(fā)展,會(huì)形成氣溶膠污染而擴(kuò)散,終導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的污染,嚴(yán)重的會(huì)關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室,如無(wú)備用實(shí)驗(yàn)室,會(huì)造成更大的損失。是否有一種快速*的解決方案呢?且看下面。
分子診斷是指利用分子生物學(xué)方法來(lái)檢測(cè)樣品中遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的變化從而做出相應(yīng)診斷的技術(shù)。由于分子生物技術(shù)的發(fā)展,人們生活水平不斷提高記憶對(duì)健康問(wèn)題更為重視,分子診斷得以迅猛發(fā)展,*快速提高。我國(guó)分子診斷產(chǎn)業(yè)雖然起步較晚,但現(xiàn)已與歐美,日本,新加坡等起步較早的國(guó)家之間的的差距也越來(lái)越小。
而由于日常檢測(cè)中要處理大量的不同來(lái)源的核酸以及核酸本身難以降解的特性,核酸污染是困擾絕大多實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)難題。微量的核酸污染會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果,這樣會(huì)對(duì)病人造成誤診,耽誤病情。如任由此情況發(fā)展,會(huì)形成氣溶膠污染而擴(kuò)散,終導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的污染,嚴(yán)重的會(huì)關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室,如無(wú)備用實(shí)驗(yàn)室,會(huì)造成更大的損失。
在與核酸污染長(zhǎng)期抗?fàn)幹?,人們也總結(jié)出了一些預(yù)防和清除核酸污染的方法。對(duì)于預(yù)防,實(shí)驗(yàn)人員一定要不斷改進(jìn)并嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室操作流程,對(duì)實(shí)驗(yàn)室不同操作進(jìn)行區(qū)域劃分,分裝試劑,定期對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行滅菌,實(shí)驗(yàn)室適當(dāng)通風(fēng),養(yǎng)成實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行陰陽(yáng)對(duì)照的好習(xí)慣。
當(dāng)污染已經(jīng)出現(xiàn),傳統(tǒng)的清除方法包括對(duì)可疑器用稀酸進(jìn)行擦拭或浸泡,紫外線照射,對(duì)反應(yīng)液用DNaseⅠ或內(nèi)切酶進(jìn)行處理等方法。這些方法對(duì)一些微量污染會(huì)有一定效果,但對(duì)污染效果不是很理想,而且紫外線照射會(huì)對(duì)人體造成一定的危害。
污染傳統(tǒng)處理方法:
準(zhǔn)備(1:50)、(1:10)高效消毒液,75%*。
2.5.1把STAR上的所有載架都拿出來(lái),用1:50的高效消毒液進(jìn)行擦拭,待作用五分鐘后用清水沖洗。
2.5.2 SATR內(nèi)部用噴壺噴灑75%*,底部金屬部分可用1:50的高效消毒液進(jìn)行擦拭,待酒精*沉降后,用清水擦拭。
2.5.3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)工作臺(tái)用1:10的高效消毒液進(jìn)行擦拭,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部用噴壺噴灑1:50的高效消毒液,等待空氣中的高效消毒液沉降后,用1:50的高效消毒液拖地,建議當(dāng)天不用清水擦拭或拖地,待第二天早上來(lái)再用清水擦拭拖地。
2.5.4實(shí)驗(yàn)室用的耗材(除用自封袋封好的),能滅菌的,均用備用滅菌鍋進(jìn)行一次滅菌。
2.5.5機(jī)器通道污染的處理,將配置好的高效消毒液(1:50)代替裂解液,加入裂解液槽里,完成加裂解液的過(guò)程,在機(jī)器每次吸取一定量的高效消毒液后,暫停十分鐘,讓高效消毒液揮發(fā)到通道內(nèi)部,反復(fù)四次即可,這個(gè)過(guò)程中用的槍尖同樣不帶濾芯。后將裂解液槽里的高效消毒液(1:50)用水洗凈后換上蒸餾水重復(fù)以上程序。(此類(lèi)方法正常情況下不建議使用,只有在污染去除不了時(shí)才慎重使用。用該方法處理過(guò)機(jī)器后,當(dāng)天不再做核酸實(shí)驗(yàn))。
總之,對(duì)于核酸污染大家一定要給予足夠的重視,提前預(yù)防,不要等到污染已經(jīng)出現(xiàn)才想辦法清除,經(jīng)常在實(shí)驗(yàn)室中配備清除污染的試劑,發(fā)現(xiàn)污染可馬上進(jìn)行處理,相信這樣核酸污染將不再是讓眾多實(shí)驗(yàn)人員頭疼的問(wèn)題。
注:實(shí)驗(yàn)室的污染不可能一次就清理干凈,需反復(fù)清理驗(yàn)證,直到實(shí)驗(yàn)結(jié)果能被采用為止。
核酸實(shí)驗(yàn)室污染的主要原因有:
1)標(biāo)本污染;2)試劑污染;3)產(chǎn)物污染;5)其他污染。
其解決措施為:其解決措施為:
1)標(biāo)本污染,重新采樣進(jìn)行檢測(cè),評(píng)估標(biāo)本前處理環(huán)節(jié);
2)試劑污染,更換新的試劑重新檢測(cè)評(píng)估;
3)設(shè)備污染,設(shè)備整體消毒清潔、維護(hù);
4)產(chǎn)物污染,全面清潔消毒實(shí)驗(yàn)室、儀器設(shè)備所有實(shí)驗(yàn)有關(guān)用品。一旦發(fā)生污染后,圍繞實(shí)驗(yàn)室尋找污染源分析污染原因耗時(shí)且很繁瑣,所以防止污染重在預(yù)防。
因核酸實(shí)驗(yàn)室污染后極其難以清除,有可能造成實(shí)驗(yàn)室不能使用的風(fēng)險(xiǎn)。但是如果一旦出現(xiàn)核酸實(shí)驗(yàn)室污染,除了上面常規(guī)的消毒清潔方法之外,另外還有一種比較好使而且快速全面*的實(shí)驗(yàn)室空間滅菌方法。根據(jù)國(guó)外DNA研究所大量實(shí)踐證明空間熏蒸消毒確實(shí)有效去除核酸污染源,時(shí)間短、高效、安全、節(jié)省勞動(dòng)力等等優(yōu)點(diǎn)。此空間熏蒸消毒方法為法國(guó)過(guò)氧化氫干霧消毒技術(shù),整體核酸實(shí)驗(yàn)室覆蓋,*,快速分解掉核酸污染源,消毒完后,隨著排風(fēng)即可清除而無(wú)殘留,省時(shí)省力。特別適用核酸實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染。
過(guò)氧化氫干霧消毒器的特點(diǎn)為:
1、滅菌效果好,生物指示劑挑戰(zhàn)降低6lg對(duì)數(shù)值,能*殺滅環(huán)境中的MRSA、VRE、結(jié)核分枝桿菌、芽孢、病毒和多重耐藥的革蘭陰性菌(鮑曼不動(dòng)桿菌);
2、活性氫氧基團(tuán)能高效分解DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物質(zhì);
3、快速空間滅菌,比起噴霧或熏蒸所需要的時(shí)間更短,實(shí)現(xiàn)更快速的密閉空間滅菌措施,預(yù)防核酸實(shí)驗(yàn)室環(huán)境空氣污染及核酸片氣溶膠污染,及快速高效去除實(shí)驗(yàn)室核酸污染源;
4、小于3微米干霧氣體,擴(kuò)散性*,能擴(kuò)散到每一個(gè)角落,空氣中做布朗運(yùn)動(dòng),消毒干霧*,專門(mén)對(duì)付小分子核酸污染源物質(zhì);
5、消毒干霧相對(duì)一般過(guò)氧化氫穩(wěn)定,自然損耗小,維持的滅菌濃度均勻,基本不受溫度、環(huán)境濕度的影響(真正的干霧才能做到這點(diǎn));
6、無(wú)色無(wú)毒,無(wú)殘留,安全可靠,當(dāng)天使用消毒清除污染,當(dāng)天即可使用實(shí)驗(yàn)室,換回?fù)p失。
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申貝科學(xué)儀器相關(guān)產(chǎn)品:
過(guò)氧化氫消毒器DS1001/1002
霧化效率:DS1001 2.5L 、 DS1002 5L
消毒劑以納微米級(jí)液珠的形式噴出達(dá)到對(duì)細(xì)菌芽孢6log殺滅效果360°環(huán)形消毒*
作用:
該產(chǎn)品應(yīng)用于對(duì)微生物限度有要求的空間區(qū)域的消毒,可直接殺滅細(xì)菌、真菌、病毒等各種微生物。
適用場(chǎng)所:
適用于生物安全實(shí)驗(yàn)室、GMP車(chē)間、傳染病房、學(xué)校、醫(yī)院、食品企業(yè)、科研院所等需要空間定期消毒的場(chǎng)所。消毒劑以納微米級(jí)液珠的形式噴出達(dá)到對(duì)細(xì)菌芽孢6log殺滅效果360°環(huán)形消毒*
PCR實(shí)驗(yàn)室核酸氣溶膠污染清除儀NC1001/NC1002
適用空間:NC1001,150-250立方米。NC1002,300-450立方米。
適用場(chǎng)所:
可用于醫(yī)院、生物化實(shí)驗(yàn)室、疾控、???、研究所、藥廠企業(yè)對(duì)微生物限度有要求的空間或物體表面的消毒殺菌,也可以用于分子生物學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中核酸氣溶膠的去除和理化實(shí)驗(yàn)室氣態(tài)污染物的清除。
功能一:空間的消毒殺菌;
功能二:核酸氣溶膠的清除,清除率>99%;
功能三:甲醛、硫化氫、苯、氨氣等氣態(tài)污染物消除,是同時(shí)具有這三種功能的裝備,成為了分子實(shí)驗(yàn)室理化實(shí)驗(yàn)室*的設(shè)備。同時(shí),PCR實(shí)驗(yàn)室核酸氣溶膠污染清除儀還具有自清潔功能,帶有HEPA過(guò)濾器及活性炭多層濾膜,完成消毒殺菌、核酸氣溶膠及氣態(tài)污染清除后,設(shè)備可自動(dòng)對(duì)空間的殘留微珠自動(dòng)吸附清除。
核酸氣溶膠污染清除儀可配備3%-35%的過(guò)氧化氫溶液用于空間的消毒,由于高于8%的過(guò)氧化氫易燃易爆,光購(gòu)買(mǎi)不方便,而且運(yùn)輸、存儲(chǔ)都需要專業(yè)的車(chē)輛和專業(yè)的倉(cāng)庫(kù),該產(chǎn)品配備8%的過(guò)氧化氫消毒劑后,也可對(duì)空間微主物達(dá)到95%以上的殺滅效果。相對(duì)于市場(chǎng)上需要匹配高度(35%)的過(guò)氧化氫的消毒裝備(閃蒸、高溫加熱),在淚同的消毒殺菌效果基礎(chǔ)上,該設(shè)備使用安全,試劑匹配更容易,對(duì)使用人員要求更低,市場(chǎng)接受度也更高。配備的核酸氣溶膠清除劑后,核酸清除率大于99%,操作簡(jiǎn)單,效果好。